副豬嗜血桿菌?。ㄓ址Q豬革拉澤氏?。怯砂退沟戮剖妊獥U菌屬的副豬嗜血桿菌感染引起的急性敗血癥，以多發(fā)性纖維素性漿膜炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎為主要特征。豬感染副豬嗜血桿菌后出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、腹部膨大、跛行和共濟(jì)失調(diào)等癥狀，死亡率高。近年來，隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化的發(fā)展，副豬嗜血桿菌病發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，可單獨(dú)或混合感染，已成為嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的新發(fā)典型性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

    2016年10月，青海省門源某豬場(chǎng)發(fā)生了一種以纖維性漿膜炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎為主要特征的傳染病，該病發(fā)病急，發(fā)病豬出現(xiàn)體溫升高、咳嗽、呼吸困難、腹部膨大等癥狀，個(gè)別病豬跛行、共濟(jì)失調(diào)，死亡率高達(dá)20%以上。剖檢可見腹腔內(nèi)有黃色液體，心包積液，胸膜、腹膜有漿液性和膿性纖維蛋白滲出。腦部腦膜出血，有血性滲出，腦回展平。肺臟淤血水腫。脾臟及腸系膜淋巴結(jié)腫脹，有纖維蛋白滲出物。采集發(fā)病豬的心包液等病料經(jīng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化鑒定、藥敏試驗(yàn)及動(dòng)物回歸試驗(yàn)檢測(cè)，確定為副豬嗜血桿菌感染。現(xiàn)報(bào)告如下。

    1  材料與方法

   （1）主要試驗(yàn)材料。病料為從青海省門源幾個(gè)豬場(chǎng)采集的疑似副豬嗜血桿菌感染的病豬的心包積液及呼吸道分泌物。健康哺乳仔豬購自河南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

   （2）主要試劑。HPS培養(yǎng)基、NAD、金黃色葡萄球菌、雞血清等試劑購自北京索萊寶科技有限公司。藥敏紙片購自北京天壇生物公司。其他化學(xué)試劑如氯仿、異丙醇、乙醇等均為國產(chǎn)分析純產(chǎn)品。

   （3）細(xì)菌的分離培養(yǎng)。無菌取發(fā)病豬的肺臟、腹膜、胸水和心血?jiǎng)澗€接種TSA平板，放置于37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，觀察生長情況及菌落特征。細(xì)菌涂片并進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

   （4）細(xì)菌的生化鑒定。將所分離細(xì)菌接種于血平板上，金黃色葡萄球菌垂直于水平線劃線，置于37℃的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)36小時(shí)，觀察是否有“衛(wèi)星現(xiàn)象”，并觀察是否有溶血現(xiàn)象。挑取具有衛(wèi)星生長現(xiàn)象的單菌落轉(zhuǎn)移接種于微量生化反應(yīng)管，按照杭州天和微生物試劑有限公司說明書進(jìn)行，觀察生化特性鑒定結(jié)果。

   （5）藥敏試驗(yàn)。無菌條件下對(duì)分離細(xì)菌培養(yǎng)物利用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，將分離的副豬嗜血桿菌菌落接種在TSA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后沾取單菌落均勻涂布于添加NAD的鮮血瓊脂平板上，用滅菌鑷子夾取各種藥敏紙片分別貼在適當(dāng)?shù)奈恢?，將培養(yǎng)皿置于37℃下培養(yǎng)48小時(shí)，觀察測(cè)定抑菌圈的大小，判斷對(duì)不同藥物的敏感性。

   （6）細(xì)菌致病性動(dòng)物回歸試驗(yàn)。將純化的分離菌增菌培養(yǎng)12～24小時(shí)制成細(xì)菌懸液，接種4只健康的哺乳仔豬，靜脈注射0.4mL/只，觀察實(shí)驗(yàn)仔豬的發(fā)病情況，剖檢死亡仔豬觀察病理變化，并取呼吸道分泌物及心包液鏡檢。

    2  結(jié)果與分析

   （1）細(xì)菌的分離培養(yǎng)。取病變部位組織研磨后接種于培養(yǎng)基37℃，培養(yǎng)48小時(shí)后觀察菌落特征。表面光滑濕潤、邊緣整齊、針尖大小無色透明的小菌落，革蘭染色可見革蘭氏陰性細(xì)小桿菌，通常可見莢膜。

   （2）細(xì)菌的生化鑒定。本實(shí)驗(yàn)選擇分離的不具有溶血特性，但依賴NAD的菌株進(jìn)行生化鑒定，生化試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌糖發(fā)酵特性活潑，能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、麥芽糖和蔗糖等，氧化酶試驗(yàn)為陰性，尿素酶、過氧化氫酶試驗(yàn)呈陽性，不產(chǎn)生吲哚。病原菌的生化鑒定結(jié)果為葡萄糖+、乳糖-、甘露糖+、麥芽糖+、蔗糖+、半乳糖+、果糖+、木糖-、接觸酶+、過氧化氫酶+、吲哚-、尿素酶-、氧化酶-、硝酸鹽還原+。“+”表示陽性/產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，“-”表示陰性/不發(fā)酵。

   （3）藥敏試驗(yàn)結(jié)果。該分離株嗜血桿菌對(duì)不同藥物的敏感程度有所差異，對(duì)環(huán)丙沙星、慶大霉素、氧氟沙星、諾氟沙星高敏，對(duì)氨芐青霉素中敏，而對(duì)林可霉素和鏈霉素不敏感，具有耐藥性，見表1。
   （4）細(xì)菌致病性動(dòng)物回歸試驗(yàn)。將分離純化的嗜血桿菌接種哺乳仔豬后，出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、腹部膨大、跛行、共濟(jì)失調(diào)等癥狀。剖檢可見呼吸道有大量的分泌物，心包積液，腹膜有漿液性纖維蛋白滲出。取其呼吸道分泌物和心包積液涂片染色鏡檢，可見革蘭氏陰性細(xì)小桿菌。

    3 討論

    副豬嗜血桿菌病在我國的發(fā)病報(bào)道越來越多，并呈流行趨勢(shì)。 根據(jù)臨床癥狀、典型病理變化，以及病原菌的分離鑒定可以進(jìn)行診斷。本試驗(yàn)中分離的病原菌從培養(yǎng)特性、染色鏡檢、溶血特性及生化特性等方面都符合副豬嗜血桿菌的生物學(xué)特性。將分離菌的培養(yǎng)產(chǎn)物接種哺乳仔豬后，出現(xiàn)該病的典型癥狀，動(dòng)物回歸試驗(yàn)證實(shí)該菌具有較強(qiáng)的致病性。剖檢癥狀與副豬嗜血桿菌的癥狀一致，證實(shí)豬群被副豬嗜血桿菌感染。

   （陳云政 青海省門源縣農(nóng)牧和科技局）